Southern blotting 又称为Southern杂交,即DNA-DNA杂交分析。是研究DNA图谱的基本技术,主要用于基因组DNA的分析,如在基因组中特异基因的定位及检测等,亦可用于分析重组质粒和噬菌体。 在遗传诊断DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。DNA印迹技术 (Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。
SDS Pr.EK 酚/氯仿 限制性内切酶 电泳
基本方法:tissue E解液 DNA 酶切片段
条带 印迹转移 取膜 杂交 显示
其中印迹转移是一夜的时间,要保证DNA完全转移,可用EB染色显示红色来测验。
(2)RNA印渍技术
Northern blotting又称为Northern杂交,即RNA-DNA杂交分析。是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。RNA印迹技术 (Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。
主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异mRNA的表达水平以及比较不同组织和细胞的同一基因的表达情况。
(3)蛋白质印渍技术
Western blotting
又称为Western杂交,或免疫印渍技术,即利用抗原-抗体反应,检测转移到硝酸纤维素膜上的特异性蛋白质。蛋白质的印迹分析 (Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究。 应用:用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白质分子的相互作用研究等。
(4)斑点印迹 Dot blotting
斑点杂交法是不经过电泳,而将被检标本直接点到膜上,烘烤固定,用于杂交。这种方法耗时短,可做半定量分析,一张膜上可同时检测多个样品。
(5)原位杂交 in situ hybridization
即组织原位杂交,指组织切片或细胞涂片直接用于杂交分析。先经适当处理,使细胞通透性增加,让探针进入细胞内与DNA或RNA杂交。因此原位杂交可以确定探针的互补序列在胞内的空间位置,这一点具有重要的生物学和病理学意义。
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